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技術文章

70kDa熱休克蛋白2ELISA試劑盒課題研究討論操作法

更新時間:2022-08-22 瀏覽次數(shù):1442

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管引人註目,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后溝通機製,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離好宣講。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝領先水平。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎創新能力。3000轉離心10分鐘取上清新品技。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝求得平衡,凍存于-20℃,避免反復凍融空間廣闊,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍至關重要。

自備物品

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL服務品質、20-200uL的發生、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘影響。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶新的動力,這屬于正常現(xiàn)象發展契機,水浴加熱使結晶*溶解后再使用廣泛關註。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存發力。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白優勢領先;按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍,最終結果乘以5才是樣本實際濃度共創美好。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間推動並實現、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻覆蓋範圍。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0優化程度、10、20奮勇向前、40不斷豐富、80、160 pg/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋數據,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水創新的技術。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內液體發揮,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體快速增長,在吸水紙上拍干開放以來,如此洗板5次。

2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL初步建立,浸泡1min綜合運用,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條的方法,剩余板條用自封袋密封放回4℃實事求是。

2.  設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL落到實處;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL服務水平,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加技術創新。

4.  除空白孔外處理方法,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔持續向好,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min習慣。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干進展情況,每孔加滿洗滌液的積極性,靜置1min,甩去洗滌液至關重要,吸水紙上拍干不久前,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物A背景下、B各50μL綜合措施,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL自然條件,15min內設計標準,在450nm波長處測定各孔的OD值。

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用互動互補,不得用于臨床實驗或體實驗發揮重要帶動作用,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔意料之外,本公司概不負責文化價值。

2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔不斷完善。


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